一、抗生素抗性基因芯片检测
1、什么是抗生素抗性基因芯片检测?
针对383个抗生素抗性基因设计的对应qPCR引物包装至薄层金属合金纳米孔芯片得到高通量qPCR芯片,基于SmartChip Real-Time PCR System可对多个样本进行高效性、高通量、高精确性和高灵敏度的目标基因检测和定量计算。同时搭建高通量自动微量加样和基因定量分析平台,可一次性高速完成5184个反应和数据分析,规避了以往传统qPCR方法的基因检测单一化、费用成本高和效率低等等缺点。
2、抗生素抗性基因芯片检测优势
(1)检测通量高,383个抗生素抗性基因同时检测;
(2)样本用量低,构建纳升级别反应体系;
(3)绝对定量,根据16S rRNA的绝对定量信息换算所有基因的绝对定量信息;
(4)特异性高,对文献及数据库收录的引物反复实验获取高特异性引物。
3、应用方向
(1)抗生素抗性基因分布特征;
(2)抗生素抗性基因传播机制研究。
4、实验流程
样本准备-> 核酸提取-> qPCR芯片反应-> 数据处理
5、分析流程
6、样本要求
土壤、淤泥、沉积物:≥ 3 g
粪便:≥ 1 g
水样滤膜:≥ 1 张
拭子样本:≥ 2 个
DNA:浓度≥ 20 ng/μL;总量≥ 2 ng
7、技术参数
生物学重复:微生物样本重复数≥3个;
检测系统:SmartChip Real-Time PCR System
项目周期:25个工作日
8、结果展示
(1)基因检测统计
根据各基因在各样本中的Ct值统计出基因检测情况,其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,在表格中标注“1”代表该基因在对应样本中检出。而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性。
(2)基因定量总表
根据SmartChip Real-Time PCR System和Canco软件给出的各基因在各样本中的Ct值,根据相对定量 = 10^(31-Ct)/(10/3)公式,计算得出各基因在各样本中的相对定量信息。而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性,并计算其平均值作为该基因在对应样本中相对定量。其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,而表格中的数值代表该基因在对应样本中的定量,数值越大意味着该基因在对应样本中的定量越高。
(3)基因绝对定量
根据16S rRNA基因的绝对定量换算得到各基因在各样本中的绝对定量信息,公式如下:
16S相对定量/16绝对定量=基因相对定量/基因绝对定量
表格中数值代表在对应样本中每微升的基因拷贝数量,而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性,并计算其平均值作为该基因在对应样本中绝对定量。其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,表格中的数值代表该基因在对应样本中的绝对定量,数值越大意味着该基因在对应样本中的绝对定量越高。
二、环境粪便污染溯源芯片检测
1、什么是环境粪便污染溯源芯片检测
针对23个环境粪便污染溯源基因设计的对应qPCR引物包装至薄层金属合金纳米孔芯片得到高通量qPCR芯片,基于SmartChip Real-Time PCR System可对多个样本进行高效性、高通量、高精确性和高灵敏度的目标基因检测和定量计算。同时搭建高通量自动微量加样和基因定量分析平台,可一次性高速完成5184个反应和数据分析,规避了以往传统qPCR方法的基因检测单一化、费用成本高和效率低等等缺点。
2、环境粪便污染溯源芯片检测优势
(1)检测通量高,23个环境粪便污染溯源基因同时检测;
(2)样本用量低,构建纳升级别反应体系;
(3)绝对定量,根据16S rRNA的绝对定量信息换算所有基因的绝对定量信息;
(4)特异性高,对文献及数据库收录的引物反复实验获取高特异性引物。
3、应用方向
(1)粪便污染溯源;
(2)环境污染管理措施制定。
4、实验流程
样本准备 ->核酸提取-> qPCR芯片反应-> 数据处理
5、分析流程
6、样本要求
土壤、淤泥、沉积物:≥ 3 g
粪便:≥ 1 g
水样滤膜:≥ 1 张
拭子样本:≥ 2 个
DNA:浓度≥ 20 ng/μL;总量≥ 2 ng
7、技术参数
生物学重复:微生物样本重复数≥3个;
检测系统:SmartChip Real-Time PCR System
项目周期:25个工作日
8、结果展示
(1)基因检测统计
根据各基因在各样本中的Ct值统计出基因检测情况,其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,在表格中标注“1”代表该基因在对应样本中检出。而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性。
(2)基因定量总表
根据SmartChip Real-Time PCR System和Canco软件给出的各基因在各样本中的Ct值,根据相对定量 = 10^(31-Ct)/(10/3)公式,计算得出各基因在各样本中的相对定量信息。而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性,并计算其平均值作为该基因在对应样本中相对定量。其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,而表格中的数值代表该基因在对应样本中的定量,数值越大意味着该基因在对应样本中的定量越高。
(3)基因绝对定量
根据16S rRNA基因的绝对定量换算得到各基因在各样本中的绝对定量信息,公式如下:
16S相对定量/16绝对定量=基因相对定量/基因绝对定量
表格中数值代表在对应样本中每微升的基因拷贝数量,而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性,并计算其平均值作为该基因在对应样本中绝对定量。其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,表格中的数值代表该基因在对应样本中的绝对定量,数值越大意味着该基因在对应样本中的绝对定量越高。
三、病原菌定量芯片检测
1、什么是病原菌定量芯片检测
针对69个病原菌基因设计的对应qPCR引物包装至薄层金属合金纳米孔芯片得到高通量qPCR芯片,基于SmartChip Real-Time PCR System可对多个样本进行高效性、高通量、高精确性和高灵敏度的目标基因检测和定量计算。同时搭建高通量自动微量加样和基因定量分析平台,可一次性高速完成5184个反应和数据分析,规避了以往传统qPCR方法的基因检测单一化、费用成本高和效率低等等缺点。
2、病原菌定量芯片检测的优势
(1)检测通量高,69个病原菌基因同时检测;
(2)样本用量低,构建纳升级别反应体系;
(3)绝对定量,根据16S rRNA的绝对定量信息换算所有基因的绝对定量信息;
(4)特异性高,对文献及数据库收录的引物反复实验获取高特异性引物。
3、应用方向
(1)病原菌丰度和分布特征;
(2)病原菌传播途径研究。
4、实验流程
样本准备-> 核酸提取-> qPCR芯片反应-> 数据处理
5、分析流程
6、样本要求
土壤、淤泥、沉积物:≥ 3 g
粪便:≥ 1 g
水样滤膜:≥ 1 张
拭子样本:≥ 2 个
DNA:浓度≥ 20 ng/μL;总量≥ 2 ng
7、技术参数
生物学重复:微生物样本重复数≥3个;
检测系统:SmartChip Real-Time PCR System
项目周期:25个工作日
8、结果展示
(1)基因检测统计
根据各基因在各样本中的Ct值统计出基因检测情况,其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,在表格中标注“1”代表该基因在对应样本中检出。而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性。
(2)基因定量总表
根据SmartChip Real-Time PCR System和Canco软件给出的各基因在各样本中的Ct值,根据相对定量 = 10^(31-Ct)/(10/3)公式,计算得出各基因在各样本中的相对定量信息。而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性,并计算其平均值作为该基因在对应样本中相对定量。其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,而表格中的数值代表该基因在对应样本中的定量,数值越大意味着该基因在对应样本中的定量越高。
(3)基因绝对定量
采用已知浓度的混合标准质粒的Ct值绘制标准曲线,将目的基因的Ct值代入标准曲线拟合公式,计算公式如下:
Y=kx+b (x为目的基因的Ct值)
表格中数值代表在对应样本中每微升的基因拷贝数量,而只有在三个技术重复中均被检出的基因,才会将该基因判定为阳性,并计算其平均值作为该基因在对应样本中绝对定量。其中在表格中标注“0”代表该基因在对应样本中未检出,表格中的数值代表该基因在对应样本中的绝对定量,数值越大意味着该基因在对应样本中的绝对定量越高。
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